Уровень 1
Уровень 2
Уровень 3
Уровень 4
Уровень 5
Уровень 6
Уровень 7

Микроскопическая диагностика микозов

Согласно инструкции СП 1.2.036-95 Госкомэпиднадзора РФ, Москва, 1996 г. "Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности” по эпидемиологической опасности дрожжевые и плесневые грибы, а также дерматофиты относятся к III-IV группам возбудителей инфекционных болезней, поэтому при работе с ними необходимо соблюдать особые правила техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены, направленные на обеспечение личной и общественной профилактики заражения, аллергизации и распространения инфекции.

Лаборатория для работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности укомплектовывается легко дезинфицирующейся мебелью, включая шкафы для чистой лабораторной посуды, реактивов, питательных сред, соответствующим оборудованием и инструментами. Для работы необходимы спиртовки или газовые горелки, микробиологические петли, микологические лопаточки, шпатели, эпиляционные и анатомические пинцеты, кусачки маникюрные, скальпели, ножницы, ложечки Фолькмана, пипетки, пастеровские пипетки, иглы препаровальные, стеклянные палочки, шприцы, низкоскоростная центрифуга, аппарат для встряхивания, чашки Петри, пробирки, стеклянная посуда, ультрафиолетовая лампа Вуда с фильтром, микроскопы, осветители, термостаты, автоклавы, холодильники, сухожаровые шкафы, бактерицидные лампы.

Взятие материала для исследования

Микроскопическая диагностика микозов подразумевает обнаружение мицелия и спор в исследуемом биоматериале. В качестве исследуемого биоматериала рассматриваются чешуйки эпидермиса, волосы и ногти. Непременным требованием перед проведением исследования является отсутствие местного лечения в течение, как минимум, десяти дней и системного лечения – в течение месяца. Следует иметь в виду, что использование пациентом моющих средств (особенно содержащих антисептики) способно повлиять на достоверность результатов исследования, поэтому за 3-4 дня до его проведения запрещают мытьё.

Инструментарий для взятия биоматериала и приготовления препарата представлен на рисунке:


Фото. Инструментарий для взятия биоматериала и приготовления препарата.

При подозрении на микоз гладкой кожи, микоз кистей и стоп без поражения ногтевых пластинок исследуются чешуйки эпидермиса с поверхности очага поражения. При микозе гладкой кожи является предпочтительным исследование эпидермиса с краевой зоны очага поражения, так как в центральной зоне патологический процесс нередко разрешается. При этом не следует забывать о возможности поражения пушковых волос, что определяет выбор дальнейшей тактики лечения. Волосы извлекают эпиляционным пинцетом. При микозе кистей и стоп без поражения ногтевых пластинок исследуются чешуйки эпидермиса из третьей и четвертой межпальцевых складок, а также с ладоней и со свода стоп.

При подозрении на грибковое поражение длинных волос (волосистой части головы, бороды, усов и лобка), а также пушковых волос выполняется их микроскопическое исследование. При трихофитии волосистой части головы волосы обламываются на расстоянии 1-2 мм над уровнем устья волосяного фолликула, напоминая при этом пеньки и точки. Если волос не удаётся захватить эпиляционным пинцетом, то в этом случае его стараются извлечь острым концом скальпеля или препаровальной иглой.

При микроспории волосистой части головы волосы обламываются на высоте 5-6 мм, напоминая «скошенный луг». При микроскопии исследуются именно эти обломанные волосы. Волосы из очагов поражения извлекают с помощью пинцета.

При фавусе исследуют истончённые волосы над поверхностью скутулы.

При подозрении на онихомикоз исследуется легко измельчающийся материал из зоны подногтевого гиперкератоза, а также сами измененные ногтевые пластинки.

Необходимо понимать, что любой исследуемый материал от пациента потенциально заразен, поэтому его взятие необходимо осуществлять в помещении, где осуществляется ежедневная влажная уборка с применением дезинфицирующих средств (5% раствор хлорамина, 5% осветленная хлорная известь), а воздух стерилизуется ультрафиолетовыми облучателями (их включают на 1-1,5 ч и входят в помещение через 20 мин после выключения). Термостаты еженедельно протирают 0,5% раствором хлорамина, стены обрабатывают дезсредствами 1 раз в месяц. Врач при работе должен быть защищён маской, защитными очками, халатом и перчатками. Инструментарий для взятия биоматериала, перчатки, предметные и покровные стёкла, одноразовые пелерины и салфетки обеззараживают после использования, погружая в 1,5% раствор клиндезина-экстра (5% раствор фенола или 5% раствор лизола) на 30 минут. Оставшийся патологический материал (волосы, кожные и ногтевые чешуйки) автоклавируют при 2 атм. и 132˚ С в течение 20 мин (контроль - мочевина) или при 1,5 атм. и 126˚ С в течение 30 мин (контроль - бензойная кислота), либо кипятят 1 час в воде или 30 мин в 1% мыльно-содовом растворе.


Патологический материал транспортируют в лабораторию в специальной таре или металлических биксах, защищая его от прямых солнечных лучей. В сопроводительном документе указывают фамилию, имя, отчество, пол, возраст и адрес больного, предполагаемый клинический диагноз, наименование исследуемого материала, время его взятия, локализацию очага, номер истории болезни, фамилию врача и учреждение, направляющее материал.

Приготовление препарата

После получения чешуек эпидермиса с очага поражения производится приготовление препарата для микроскопического исследования. На исследуемый материал, помещенный на предметное стекло, наносят 1-2 капли 20% КОН, после чего предметное стекло подогревают над пламенем горелки до появления белесоватого ободка кристаллизованной щелочи по периферии. Затем препарат накрывают покровным стеклом (которое придавливают препаровальной иглой) и микроскопируют. Исследование необходимо проводить не позднее 2-х часов после приготовления препарата из-за возможности кристаллизации щёлочи.

Способ приготовления препарата волоса при подозрении на его грибковое поражение соответствует ранее описанному, с той лишь разницей, что покровное стекло не придавливается препаровальной иглой (во избежание раздавливания волоса).


Фото. Появление ободка кристаллизованной щелочи.

Для приготовления препарата кусочки срезанных ногтевых пластинок опускают в пробирку с 20% КОН и экспонируют в термостате в течение 1 часа (t≈37˚C), а затем получившуюся желеобразную массу переносят на предметное стекло, накрывают покровным и исследуют под микроскопом.

В отличие от ногтевых пластинок образцы из легко измельчающегося материала зоны подногтевого гиперкератоза помещают на предметное стекло, на них наносят 1-2 капли 20% КОН, после чего предметное стекло подогревают над пламенем горелки до появления белесоватого ободка кристаллизованной щелочи по периферии (рис.65). Затем препарат накрывают покровным стеклом, которое осторожно придавливают препаровальной иглой, и исследуют под микроскопом.

Микроскопия препарата

Для проведения микроскопического исследования используют лабораторный микроскоп без применения иммерсии. Микроскопия чешуек эпидермиса, чешуек из зоны подногтевого гиперкератоза, а также растворенных ногтевых пластинок производится вначале на малом увеличении (×100), а при обнаружении нитей мицелия, напоминающих «карту рек» (железных дорог), объектив переводится на бȯльшее увеличение (×400). Мицелий на среднем увеличении напоминает причудливой формы стеклянные палочки, изменяющие степень преломления света при работе микровинтом микроскопа.

Микроскопия препарата волоса производится сразу на среднем увеличении (×200 или ×400). При трихофитии внутри волоса обнаруживаются крупные споры, расположенные рядами, тогда как при микроспории внутри волоса имеется множество мелких мозаично расположенных спор (отсюда термин «микроспория»). Иногда отмечают наличие чехлика снаружи волоса – это характерно для как трихофитии (вариант ectothrix, споры при этом крупные), так и для микроспории (в этом случае чехлик состоит из мелких спор). При микроскопии пораженных волос при фавусе, внутри волоса кроме скоплений спор круглой или многоугольной формы, обнаруживаются пузырьки воздуха и нити мицелия.

Препараты необходимо просмотреть не позднее 2 часов с момента их приготовления из-за возможности кристаллизации щелочи. Для повышения надежности диагностики следует сделать несколько препаратов (не менее двух) из одного очага поражения. Возможные ошибки при микроскопической диагностике микозов могут быть связаны как с некачественным приготовлением препаратов (перегревом над пламенем горелки, что сопровождается преждевременной кристаллизацией щелочи), а также с недостаточным опытом исследователя (когда за нити мицелия нередко принимают волокна ткани, случайно оказавшейся в препарате).


Доступ ограничен: Купить подписку